猪免疫球蛋白M ELISA试剂盒ELISA法

               猪免疫球蛋白M ELISA试剂盒ELISA法
ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
猪免疫球蛋白M ELISA试剂盒敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断试剂盒。且拥有试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等特点。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。ELISA常用方法：双抗体夹心法测定。规格：96T/48T
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%。保存条件及有效期：试剂盒保存：2-8℃，有效期：6个月。
测定时一般需经过以下步骤：固相包被→加待测样品→温育→洗涤+加酶标物→温育→洗涤→加底物→温育一加终止液→比色→判定结果。ELISA操作较繁杂，操作不当将引起较大的误差。在操作中应注意以下5个方面。
1．随着病情的进展或由其他因素影响，某些抗体在机体内的含量发生大幅波动，因此有必要对标本进行预处理，例如对血清标本作适当稀释，或离心分离血脂等。间接法测定中，标本适当稀释还可降低非特异性反应。
2．加样一般使用加液器，在ELISA中一般有4次加样：加标本、加酶结合物、加底物和加终止液。加标本时必须每份标本使用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶结合物、底物和终止液时则不需更换吸嘴。
3．在成批手工检测中，还应注意操作时差的影响。加样及混匀时间的差异，使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致，对竞争法及定量检测影响很大，不注意可能会导致错误结果或定量不准。
4．洗涤是ELISA操作过程中决定实验成败的一个关键步骤。目的是除去未结合的免疫反应物，终止抗原抗体反应，除去标本中与反应无关的成分、游离的酶标物以及反应过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手工洗板，前者洗涤质量较好，各反应孔洗涤效果均一，批内、批间差异小，手工洗板应注意控制各孔洗涤效果，差异不宜太大。
5．准确判定结果须使用ELISA测读仪（酶标仪），比色法判读可选择单波长或双波长，根据反应液颜色的不同选用不同波长的滤光片，以空白孔校零测定反应孔的吸光度值（A值）。酶标仪具有良好的重复性。
ELISA试剂组成
1．抗原 在ELISA中应用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。主要有3类，即自然抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。
2．抗体 在ELISA中应用的抗体可分为多克隆抗体（多抗）和单克隆抗体（单抗）。多抗取白免疫动物的抗血清，制备较简单，但抗血清成分复杂，除含针对抗原（多个表位）的抗体外，还含有多种其他抗体，亲和力和特异性相对要低于单抗，且制备周期长，批间差异较大。
3．酶和底物 在ELISA中zui常用的酶为HRP和ALP
（1）HRP：是一种糖蛋白，含糖量约18％，分子量为44kD，在蔬菜作物辣根中含量很高。（2）ALP：是一种磷酸酯的水解酶，用做示踪酶的ALP活性应在l 000U／mg以上。
4．固相载体 固相载体是ELISA中用以分离结合标记物和游离标记物的主要手段，应与各种免疫活性物质有良好的结合性能并且不改变其免疫活性。常用的固相载体有聚苯乙烯塑料和硝酸纤维素膜。
5．包被 将免疫活性物质（抗原或抗体）结合于固相载体上的过程称为包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纤维薄膜等；常用的方法有吸附法、化学交联法及亲和素-生物素间接包被法。