小鼠胰岛素试剂盒操作原理

小鼠胰岛素试剂盒实验规则：
       1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但有专业人员进行矫正。
        2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。
        3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。
        4、实验时，要使底物避光保存。
        5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
        6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
        7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
        8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
        9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
        10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
        11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
        12、底物是光敏感的，要在临用前现配。
        13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。
        14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
        15、待检样品要澄清，否则会影响结果。
        16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
        17、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。
        18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
小鼠胰岛素（INS）Elisa试剂盒操作步骤
1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μ；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。
7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s（或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色15min。
10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。
11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。
12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。