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恒远产品文献:RT-PCR试剂盒在文献中的应用

  • 发布日期:2019/11/8      浏览次数:627
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    萝卜硫素对肾小管上皮细胞氧化应激及 Nrf2 /HO -1信号通路的影响
    覃正碧1 毛卫林2 ( 湖北民族学院附属民大医院 1. 药学部; 2. 泌尿外科 湖北恩施 445000)

    摘 要 目的: 探讨萝卜硫素( SFN) 对肾小管上皮细胞( HK-2) 的氧化应激及核转录因子 E2 相关因子 2( Nrf2) /血红素加氧酶( HO) -1 信号通路的影响。方法: 体外培养 HK-2 细胞,将细胞分为空白对照组、H2O2处理组、H2O2 + 10 μmol·L - 1 SFN 组、H2O2 + 20 μmol·L - 1 SFN 组和 H2 O2 + 40 μmol·L - 1 SFN 组; 测定 HK-2 细胞中丙二醛( MDA) 、一氧化氮( NO) 、谷胱甘肽( GSH) 的含量及超氧化物歧化酶( SOD) 的活性; RT-PCR 和 Western Blot 法分别检测 Nrf2 和 HO-1 mRNA 及蛋白表达水平。结果: 与空白对照组相比,H2O2处理组中 MDA、NO 含量明显升高,GSH 水平和 SOD 酶活性显著降低( P < 0. 05) ; 经高、中、低 3种浓度的萝卜硫素处理后 MDA、NO 含量显著降低,GSH 水平显著升高,SOD 酶活性也显著升高,Nrf2 和 HO-1mRNA 及蛋白表达明显上调( P < 0. 05) 。结论: 萝卜硫素有抗 HK-2 细胞氧化应激损伤的作用,其作用机制可能与激活 Nrf2 /HO-1 信号通路有关。
    关键词 萝卜硫素; 肾小管上皮细胞; 氧化应激; 核转录因子 E2 相关因子 2; 血红素加氧酶
    萝卜硫素( sulforaphane,SFN) 又名莱菔硫素,是从蔬菜中发现的植物活性物质,具有良好的抗癌效果,在西蓝花、芥蓝等十字花科植物中的含量非常丰富,并且是一种多功能的酶诱导物,可诱导Ⅱ型解毒酶的产生而起到抗癌的作用[1 ~ 4]。大量实验结果表明萝卜硫素可以在体外抑制多种肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,但其作用机制目前尚不清楚。在多种病变细胞中均存在氧化应激损伤,而氧化应激是指机体或细胞内氧自由基的产生失衡,或外源性氧化物质摄入过多,导致活性氧在细胞内累积所致的毒性反应。研究还表明氧化应激过程是肿瘤发生、发展的一个重要促进因素。核因子相关因子 2( Nrf2) 属于碱性亮氨酸拉链蛋白家族成员,在抗炎应答元件( ARE) 介导的抗炎症抗氧化基因表达中起重要作用[5]。Nrf2 可进入核内,与 ARE 结合,并参与下游Ⅱ相代谢酶基因的转录,其中就包括血红素加氧酶( HO-1) 。Nrf2-ARE 通路具有细胞保护的作用,并能通过产生 HO-1 发挥抗
    炎抗肿瘤的作用。HO-1 属于热休克蛋白家族,具有明显的抗炎抗氧化作用,是血红素代谢的限速酶[6]。本研究将外源性活性氧过氧化氢( H2O2 ) 作用于肾小管上皮细胞( HK-2) ,探讨萝卜硫素对 HK-2 细胞氧化应激及 Nrf2 /HO-1 信号通路的影响。
    1 材料及方法
    1. 1 材料
    HK-2 细胞株购置于上海科学生物研究所( 从美国 ATCC 细胞库引进) ,萝卜硫素( 上海原叶生物有限公司,CAS No. 121-42-3,含量≥99% ) ; RPMI1640 培养基( Thermo Scientific 公司,中国北京) ; 胎牛血清( Gibco 公司,批号 20160954) ; 胰蛋白酶( 上海谷歌生物有限公司,批号 C2385) ; 丙二醛( MDA)含量测定试剂盒 、一氧化氮( NO) 含量测定试剂盒、超氧化物歧化酶( SOD) 活性测定试剂盒、谷胱甘肽( GSH) 含量测定试剂盒均购自南京建成生物工程有限公司。CCK8 试剂盒( 上海纪宁实业有限公司,批号 B1549) ; RIPA 裂解液( 上海吉诺公司,批号C1478) ; SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒( 上海谷歌生物有限公司,批号 147566) ; BCA 试剂盒( 上海谷歌生物有限公司,批号 P0012S-54) ; BSA 粉末( 武汉谷歌生物有限公司,批号 20160815) ; RT-PCR 试剂盒( 上海恒远生物科技有限公司,批号 P0023D-57) ; β-actin、Nrf2、HO-1 一抗均购自美国 Sigma 公司; 二抗羊抗兔 IgG 购自美国 Sigma 公司。

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