补肾更年方对去除卵巢大鼠血清 E2 水平及下丘脑 EＲα 蛋白表达的影响
张兰1 邰迎春1 王渊2 侯淑红1＊＊ 雷莉妍2
( 1． 陕西中医药大学附属医院，陕西 咸阳 712000; 2． 陕西中医药大学，陕西 咸阳 712046) 摘 要: 目的 治疗补肾更年方对去除卵巢大鼠血清 E2 水平和下丘脑 EＲα 蛋白表达的影响，探讨其效应机制。方法 将 40 只大鼠用手术去除卵巢后随机分为补肾更年方大剂量组、中剂量组、小剂量组和己烯雌酚组，并与 10 只模型组和 10 只空白组做对照，补肾更年方大、中、小剂量组以不同剂量灌胃，模型组和空白组以生理盐水灌胃，己烯雌酚组以己烯雌酚按 1mL/100g 的剂量灌胃，连续 45 d，结束后，取血，放免法检测血清 E2，Westernblot 法检测大鼠下丘脑 EＲα 蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠血清 E2 水平显著降低、下丘脑 EＲα 蛋白表达显著减少( P ＜ 0． 01) ; 与模型组比较，补肾更年方大、中剂量组和己烯雌酚组能够显著升高大鼠血清 E2水平并增加下丘脑 EＲα 蛋白表达( P ＜ 0． 05) ，补肾更年方小剂量组对其无明显影响( P ＞ 0． 05) 。 结论 补肾更年方在改善去除卵巢大鼠血清 E2 水平同时，可能通过影响 EＲα 蛋白的表达，提高 EＲ 的生物效应，从而发挥对更年期综合征的治疗效应。
关键词: 去除卵巢大鼠; 补肾更年方; E2 ; EＲα
中图分类号: Ｒ271． 11 + 2 文献标识码: A 更年期综合征( menopausal syndrome，MPS) 是一种以植物神经功能紊乱为主要表现伴有神经心理症状的妇科常见症候群，对妇女的工作、生活以及身心健康产生了较为严重的影响［1］。由于现代社会人们生活方式的改变、身心压力的与日俱增以及人口老龄化结构的形成，本病发病率逐年上升且发病年龄较以往提前［2 － 3］。中医学认为，肾虚为本病根本病机，有鉴于此，我们以滋阴降火为治法，自拟补肾更年方，在临床取得了良好疗效。本研究拟治疗补肾更年方对去除卵巢所致更年期综合征大鼠血清雌二醇( E2 ) 水平和下丘脑雌激素受体 α( EＲα) 蛋白表达的影响，以期进一步明确其作用机制。
1 材料和方法
1． 1 药物与试剂 补肾更年方( 熟地黄 15 g，地骨皮 12 g，山药 10 g，知母 10 g，黄柏 10 g，白芍15 g，酸枣仁 15 g，yin羊藿 10 g，炙甘草 6 g) ，中药饮片由陕西中医中医药大学附属医院中药房提供; 己烯雌酚片( 规格: 0． 5 g /片) ，天津力生制药股份有限公司，国药准字 H12020154; 兔抗鼠 EＲα 蛋白抗体，兔抗鼠 GAPDH 抗体，Santa Cruz 公司; E2 免疫试剂盒，上海恒远生物科技有限公司。
1． 2 实验动物 SD 大鼠，雌性，2 ～ 3 月龄，体质量 250 ± 20g，西安交通大学动物实验中心，动物合格证号: SCXK( 陕) 2016 － 015 号。
1． 3 主要仪器设备 离心机( 广州仪科实验室技术有限公司) ; 凝胶成像分析系统( BIO － ＲAD 公
司) ，Image － proplus 6． 0 图像分析系统( Media Cybernetics 公司) ; γ － 911 全自动放免计数仪( 中国科技大学实业总公司) 。
1． 4 分组、模型组大鼠制备方法 将大鼠随机分为空白组、模型组、西药组、补肾更年方大剂量组、中剂量组、小剂量组共 6 组，每组 10 只。模型组大鼠即 去 除 卵 巢 大 鼠，采 用 10 % 水 合 氯 醛，以300 mg /kg的剂量通过腹腔注射将大鼠麻醉后，将其进行仰卧位固定，对其下腹部进行备皮消毒，切口部位定位于下腹部阴道口上方 2 cm 处，对此处进行正中切口，长度为 1cm，再将腹壁进行逐层切开，暴露双侧卵巢并在其下方进行结扎，将其切除，用青霉素对此部位进行冲洗，后将腹壁肌层和皮肤连续缝合［4］。 1． 5 空白组大鼠制备方法 即假手术组，麻醉、体位、切口、消毒、缝合同模型大鼠制备方法，但不切除卵巢，而是将卵巢周围少量脂肪组织清除。
1． 6 各组干预方式 对于补肾更年方组，将补肾更年方各组成药物，煎煮 浓 缩 成 汤 剂，大 剂 量 组 按1． 5mL/100g、中 剂 量 组 按 1mL/100g、小 剂 量 组 按0． 5mL/100g，对大鼠进行灌胃; 对于西药组，将己烯雌酚片用蒸馏水制成含有己烯雌酚 0． 01 mg /mL 的溶液，按1mL/100g 的剂量对大鼠进行灌胃; 对于空白组和模型组，均在每日同一时段进行同种程度抓取，采用生理盐水，按 1mL/100g 的剂量对大鼠进行灌胃。上述6 组均进行每日1 次的干预，连续治疗45d。 ......想要阅读文章全文，可点击下载，也可联xi我司业务员领取！ |
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