恒远解析检测VEGF促进血管内皮细胞增殖活性的方法

          上海恒远生物解析检测VEGF促进血管内皮细胞增殖活性的方法

血管生成（Angiogenesis）是指从已有的毛细血管或毛细血管后静脉发展而形成新的血管，主要包括：激活期血管基底膜降解；血管内皮细胞的激活、增殖、迁移；重建形成新的血管和血管网，是一个涉及多种细胞的多种分子的复杂过程。血管形成是促血管形成因子和抑制因子协调作用的复杂过程，正常情况下二者处于平衡状态，一旦此平衡打破就会激活血管系统，使血管生成过度或抑制血管系统使血管退化。

1．用牛肾上腺内皮细胞（AEC）检测VEGF活性

1）取12孔细胞培养板，每孔加0.5ml含1×10⁴牛肾上腺血管内皮细胞的细胞培养液。

2）用含0.2％明胶的PBS系列稀释待测样品，每孔加0.5ml稀释样品，以后隔天更换同样浓度的稀释样品；对照孔加0.5ml细胞培养液。在37℃ 5％ CO₂的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4～5天。

3）用MTT法、[³H]脱氧胸苷掺入法或直接用胰蛋白酶消化后计数细胞的方法计数生长的细胞数。绘制剂量-反应曲线，取能引起50％zui大增殖反应的zui高样品稀释度为1U VEGF。

上海恒远生物供应的血管内皮生长因子试剂盒（英文：vascular endothelial growth factor，简称：VEGF），早期亦称作血管通透因子（英文：vascular permeability factor，简称：VPF)，是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子（heparin-binding growth factor），可在体内诱导血管新生（induce angiogenesis in vivo）。本月主推大鼠，小鼠，人等种属试剂盒，咨询。

2．用人脐带静脉内皮细胞（HUVE）检测VEGF活性

1）分离HUVE。取明胶包被的48孔细胞培养板，每孔加6000个细胞，含15mmol/L Hepes、20％胎牛血清和抗生素的199培养液，以及用同样培养液系列稀释的待测样品，总体积0.4ml。在37℃ 5％ CO₂的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养12小时。

2）加入0.64μCi（23.68kBq）[³H]脱氧胸苷，继续培养60小时，用含1％ BSA的pH7.5 Hank液洗涤各孔。用含0.1mol/L NaOH的0.2mol/L Na₂CO₃溶液溶解细胞，释放DNA。溶解物在液体闪烁计数仪上计数放射性掺入量，同上决定样品中VEGF的含量。