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ELISA实验关键注意要点!

  • 发布日期:2024-06-18      浏览次数:127
    • 上海恒远生物科技有限公司成立于2010年12月,集研发、生产、销售为一体,以科研试剂生产、诊断试剂原料供应生产为核心,致力于为全球来自高等院校、科研机构、诊断试剂生产厂家以及生物制药公司的广大客户们提供高质量生物产品。恒远生物现拥有各物种基因产品50余万种;重组蛋白20余万种;数十个种属的多克隆抗体3万多种和高质量单克隆抗体数百种。恒远品牌自主研发ELISA试剂盒,现已涵盖20多个种属,数千种产品,涉及肿瘤、激素、自身免疫、心血管、代谢等十多个研究领域。恒远生物为大家总结,ELISA试剂盒实验时至关重要的步骤有:


      一、重要的洗涤:
      不充分的洗涤会导致差异和高背景,从而带来不理想的实验结果。如果未结合的材料残留在微孔板中,那么它会增加背景噪音。有必要的话,可增加洗涤液中的盐浓度,这会阻止非特异结合反应。如果背景过高,怀疑洗涤不够时,可以尝试增加洗涤次数。

      二、关键的封闭:
      封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。如果背景过高,怀疑封闭不充分,那么可以尝试使用更高浓度的封闭液,或适当延长封闭时间。目前主要有两种类型的封闭液:蛋白和非离子型去污剂。使用的类型须取决于多个因素,包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合,但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。

      三、抗体浓度须优化:
      如果试剂稍有不同,则可能需要优化抗体的量。非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点,切勿使用过多的一抗或二抗。

      四、检测试剂要适量:
      切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高,或者未正确稀释,则会导致高背景。ELISA试剂盒也不要显色过度,如有必要,优化一下何时应加入终止液。只有确保每一步操作都做到位,才会呈现好的实验结果。所以ELISA实验的每一步都很重要,不可以掉以轻心。

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