恒远生物温馨提醒广大科研者:做实验前都必须做好充足的准备(试剂准备、实验仪器准备、样本准备、实验参与人员指标等等)。本周我司技术人员就ELISA实验的准备工作提供详细的介绍说明。一起来看看!
为了使最终的ELISA实验结果就要较高的可靠性,应在实验开始前必须做好的前期准备工作包括对实验所需的仪器进行质控。使仪器保持好的工作状态,应建立维护和校正仪器的标准操作程序,常见的需要控制的仪器包括:移液器(加样枪)、温箱、洗板机和酶标仪。具体质控操作请参考如下要求:
移液器: ELISA加样量小(20-200μl),其准确性直接影响实验结果,利用称重法检查:低、中、高三个刻度分别吸取指示量的水,万分之一天平称重后计算吸量是否准确,一般应在±5%以内。
恒温箱: 经常检查恒温箱温度计所示的温度和水中(或温箱内)实测温度是否一致,允许有±1℃的误差。
洗板机: 每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定,一般不超过2μl;人工扣板时,垫纸不湿;定期检查管孔是否堵塞。
酶标仪:经常维护其光学部分,防止滤光片霉变,定期检测校正,使其保持良好的工作性能。
ELISA实验有检测人的,也有检测各种动物、植物的某个指标,甚至老师在设计实验课题时会要求同时检测多个指标。那么需要的样本量取决于你的检测项目,有些检测项目需要血清做1:100稀释, 甚至是更高的稀释度,那么几微升血样就够了,有些项目只能做较低的稀释,甚至不稀释,这样的话每孔会需要100 ul 左右。zui少的盒子需要10ul,有的需要50,多的需要100。
大多数试剂盒的细胞因子检测是要稀释的,稀释的倍数各有不同。你的检测指标要用多少,如果你能要到试剂盒的说明书,就能确定;如果不能确定用什么试剂盒,建议你每个指标留100ul的血清(血浆、组织匀浆、脑脊液、尿液等其他相关液体样本)应该可以的,采集样本时如果样本充裕,建议您可以用两支试管分装样本,以便实验完成后需进一步实验问题分析。关于抗凝血和得到的血清血浆体积的关系,大致上比例是1毫升全血可以得到500 ul 血清或血浆。
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