恒远解析:一抗孵育的起始条件及孵育的优化

    实验的所有步骤都必须经过优化，以便观察到特异染色，并尽可能减少非特异的背景染色。这包括开展预实验，以确定每个一抗的适当孵育条件。抗原亲和纯化的多克隆抗体的稀释度通常低于单克隆抗体，但这些值必须根据经验确定。
注意：为了获得可靠特异的信号，应采用交叉反应性极少的高质量抗体。
1、一抗孵育的起始条件：


2、一抗孵育的优化：
   一抗浓度、稀释液、孵育时间和温度都影响了染色质量。这些变量需要针对每个抗体和样品来优化，以便实现特异染色和低背景。优化通常是保持孵育时间和温度不变，而改变抗体浓度，以确定何时获得*信号和低背景噪音。例如，如果使用高亲和力的抗体，那么相对较高的浓度可能需要较短的孵育时间。相反，较低的抗体浓度可能需要较长的孵育时间。人们通常采用较长的孵育时间，以确保抗体*渗透到体视学技术所用的组织切片。为了促进特异染色，较长时间的孵育通常在低温下开展（即4°C vs 室温）。
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