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恒远解析:一抗孵育的起始条件及孵育的优化

  • 发布日期:2018-03-20      浏览次数:5045
    •     实验的所有步骤都必须经过优化,以便观察到特异染色,并尽可能减少非特异的背景染色。这包括开展预实验,以确定每个一抗的适当孵育条件。抗原亲和纯化的多克隆抗体的稀释度通常低于单克隆抗体,但这些值必须根据经验确定。
      注意:为了获得可靠特异的信号,应采用交叉反应性极少的高质量抗体。
      1、一抗孵育的起始条件:


      2、一抗孵育的优化:
         一抗浓度、稀释液、孵育时间和温度都影响了染色质量。这些变量需要针对每个抗体和样品来优化,以便实现特异染色和低背景。优化通常是保持孵育时间和温度不变,而改变抗体浓度,以确定何时获得*信号和低背景噪音。例如,如果使用高亲和力的抗体,那么相对较高的浓度可能需要较短的孵育时间。相反,较低的抗体浓度可能需要较长的孵育时间。人们通常采用较长的孵育时间,以确保抗体*渗透到体视学技术所用的组织切片。为了促进特异染色,较长时间的孵育通常在低温下开展(即4°C vs 室温)。
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