“恒远公司”ELISA操作流程

 ELISA操作流程：

1. 根据需要，将若干孔德条带放置在支架上；

 

2. 将标本、阴性质控、阳性质控以及标准品作 1：200 稀释（将５μｌ样品加稀 释液稀释到 1ml，混匀） ；

 

3. 取 100μl 已稀释的血清样品、标准品和阴性质控、阳性质控加入相应得孔板 内（质控和标准品至少需做两孔） ，A1 孔不加液体作为空白底色；

 

4. 在 37℃温箱中放置 30 分钟；

 

5. 到时间后将孔被液体甩去，并用 1X 洗涤液反复清洗 4 次，zui后用蒸馏水洗 一次；

 

6. 在每孔内加 100μl 酶结合物（需按比例稀释，除 A1 孔外） ，轻微混匀；

 

7. 在 37℃温箱中放置 30 分钟；

 

8. 甩去孔内酶结合物，用 1X 洗涤液反复清洗 4 次，zui后用蒸馏水洗一次； （包括 A1 孔也加） ，轻微

 

9. 在每孔内加 100μlTMB（使用前混合Ａ液和Ｂ液） 混匀；

 

10. 37℃放置 15 分钟； ，轻微混匀；

 

11. 每孔加 50μl 1N 硫酸终止液（包括 A1 孔）

 

12. 在 15 分钟内，用酶标仪在 450nm 处读取吸光度值（OD 值） （将酶标仪 A1 孔设定为空白孔） 。

 

二、 ELISA试剂盒结果换算：

 以标准样品的 OD 值为轴，标准样品的数值为 X 轴，在方格纸或计算机上作 出标准曲线，然后根据标本的 OD 值读数在标准曲线上读出相应的 IgG 抗体 浓度。

 

三、 ELISA试剂盒结果判定：

 阴性：抗体浓度≤20u/ml 为正常 阳性：抗体浓度＞20u/ml 为阳性

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