大鼠β内啡肽(β-EP)试剂盒使用说明书

大鼠β内啡肽(β-EP)试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：                                              96T

50pg/ml- 1600pg/ml

 使用目的：

本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本β内啡肽(β-EP)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠β内啡肽(β-EP)水平。用纯化的大鼠β内

啡肽(β-EP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β内啡肽(β

-EP)，再与 HRP 标记的β内啡肽(β-EP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过

*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化

成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的β内啡肽(β-EP)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长

下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠β内啡肽(β-EP)浓度。   

试剂盒组成   

1  30 倍浓缩洗涤液  20ml×1瓶  7  终止液  6ml×1 瓶

2  酶标试剂  6ml×1瓶  8  标准品(3200pg/ml)  0.5ml×1 瓶

3  酶标包被板  12 孔×8条  9  标准品稀释液  1.5ml×1 瓶

4  样品稀释液  6ml×1瓶  10  说明书  1 份

5  显色剂A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 张     

6  显色剂B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 个

标本要求   

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

1.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

1600pg/ml  5 号标准品  150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液

800pg/ml  4 号标准品  150µl的5 号标准品加入150µl标准品稀释液

400pg/ml  3 号标准品  150µl的4 号标准品加入150µl标准品稀释液

200pg/ml  2 号标准品  150µl的3 号标准品加入150µl标准品稀释液

100pg/ml  1 号标准品  150µl的2 号标准品加入150µl标准品稀释液

 2.  加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同) 、标准孔、

待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50µl， 待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.  温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。       

4.  配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。   

7.  温育：操作同3。

8.  洗涤：操作同5。

9.  显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10.  终止：每孔加终止液 50µl，终止反应(此时蓝色立转黄色) 。

11.  测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止

液后 15分钟以内进行。

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间

控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值

大于标准品孔*孔的OD 值) ，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计

算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5) 。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.  如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存： ；2-8℃。

2．有效期：6个月