人γ干扰素（IFN-γ）酶联免疫诊断试剂盒使用说明书

人γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫诊断试剂盒使用说明书 
上海恒远生物科技有限公司 
本试剂盒仅供研究使用。 
药品名称： 
通用名：人γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫诊断试剂盒 使用目的： 
本试剂盒用于测定人血清、血浆、或其它相关组织液中γ干扰素(IFN-γ)含量。 实验原理 
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的人γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ)，再与HRP标记的羊抗人受体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人γ干扰素(IFN-γ)含量。

 试剂盒组成

 1 20倍浓缩洗涤液 50ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（150μg/L） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张   6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 
标本处理及要求  
1．血清、血浆、脑脊液、腹腔液标本可直接测定； 
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 
3．采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 
操作步骤 
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后在*孔和第二孔中先各取50μl弃掉；再各取50μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为100μg/L，50μg/L ，25μg/L，12.5μg/L，6.25μg/L）。 
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

 7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。 

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 
 
计算 
  以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。  注意事项 
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值
大于标准品孔OD值的1.5倍），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 
7．试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 
 
检测范围：6.25 pg/ml-400 pg/ml 灵敏度：1.56 pg/ml 发表外文文献二篇 
规格： 
96人份/盒 
保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。