ELISA试剂盒常见问题解析

                                                       ELISA试剂盒问题解析
    设计ELISA复孔检查时，是对同一个样品作两次稀释，再分别加到板上的两个孔，还是只稀释一次，然后吸取两次分别加到两个孔？前者似乎把稀释时的误差也考虑到了，但做出来的结果两个孔相关挺大的。而较常使用的是哪种稀释方法？
    为了减小误差，是先稀释再加样。而针对这位客户所遇到的疑问，我公司技术人员是这样解说的：
    1. 前者测的是稀释和移液的误差，后者只有移液误差。
    2. 一般都是稀释一次，分两孔吧。同浓度的分复孔。
    3. 由于是从同一原液稀释，一般不考虑稀释误差(稀释误差是存在的)，都是稀释到想要的倍数直接分孔(而不是一一稀释，这样可以使稀释误差减小)。
    4. 复孔是为了排除移液体积，板的影响，以及其他系统误差的，要求复孔的浓度是一致的。稀释后分孔能满足此要求，一一稀释不能。

ELISA操作技巧
    1.操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度（保持在18 C～25℃）、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，要先查看水育箱温度，ELISA试剂盒是否符合要求。
    2.正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂，避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要清洗干净，避免污染，加样次序要与说明书一致，否则可导致结果错误，实验重复性差。
    3.手工洗板加洗液时冲击力不要太大，洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数，洗液在反应孑L内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孑L间窜流，造成孔问污染，导致假阴性或假阳性。
    4.要保证加液量一致 我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量不准，造成显色不统一，判断错误。
    5.显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。