通常我们可用于ELISA检测的样本是有多种类型的,如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等,不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的*步,下面简单介绍一下细胞裂解液样本及组织匀浆样本的正确采集、处理方法。
细胞裂解液
1) 吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
2) 收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。
3) 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
4) 将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎,以达到裂解的目的。
5) 4℃10000×g 离心10min,除去细胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
组织匀浆液
1) 将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗,洗去组织表面残留的血液或杂质。
2) 将组织块称重,记录后剪碎,碎块应尽量小,便于匀浆得更充分。
3) 将组织按一定的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆,匀浆时置于冰上或冰浴中。(通常按组织重量:PBS体积=1:9的比例匀浆,例如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数)。
4) 吸取匀浆液到离心管,4℃5000×g 离心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
注意:保证样本不含NaN3,因为NaN3会抑制HRP的活性,从而导致假阴性的结果。