猪瘟抗体ELISA实验操作要领

山东农业大学的赵老师于去年12月在我公司代测猪瘟抗体，白介素，干扰素等相关系列21个指标的ELISA实验：现需发表文献特我公司关于猪瘟抗体等实验的详细操作流程，我司技术做出如下详细解答：

1．用包被液将猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原、猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原各做100倍稀释，每孔包被100μl，4℃湿盒放置一夜。
2．次日取出，甩去孔内液体，3×3′冲洗。
3．将待检血清以PBS液做400倍稀释，每孔加100μl同时将猪瘟阳性血清、猪瘟阴性血清各做100倍稀释，于对照孔中加100μl。37℃温育1.5h～2h。
4．重复第二步，取出，甩去孔内液体，3×3′洗涤。
5．将兔抗猪IgG酶标抗体以PBS液做100倍稀释，每孔加100μl，37℃温育1.5h～2h。
6．重复第4步。
7．每孔加底物溶液100μl，室温下观察显色反应。当阴性对照孔稍显色时，立即终止反应，并以阴性孔做空白对照。
8．每孔加终止液50μl立即于酶联免疫吸附检测仪测定490nm波长的光密度。
（三）结果判定
在猪瘟弱毒酶联板上，OD≥0.2，为猪瘟弱毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟弱毒抗体阴性。
在猪瘟强毒酶联板上，OD≥0.5，为猪瘟强毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟强毒抗体阴性。