ELISA试剂盒实验步骤

 ELISA试剂盒实验步骤

 




1.试剂准备：阳性对照品，酶标抗体，底物，

2.样品提取：所需工具（研钵）

3.设计酶标板布局；设两个阳性对照，两个空白对照（空白对照孔不加样品  及酶标试剂，其余各步骤操作相同），样品孔。

4.加样品到反应孔；每个孔100ul

5孵育（室温下2小时）一般均采用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，zui后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。

6酶标抗体的制备

7洗板；孵育结束后，将反应孔中试剂倒出，加入250ul的1倍PBST缓冲液，之后快速倒出，重复2次。

8加酶标抗体；每孔100ul

9孵育；室温2小时

10PNP底物的制备

11洗板

12加底物

13孵育；30到60分钟

14终止反应；50ul 3摩尔的氢氧化钠（选作）