软琼脂法

软琼脂法

0.6% media-agar混合层底部。

使0.6%琼脂混合下列组件（这使得200毫升）：

二甲醚100毫升

如果20毫升

笔/ 2毫升ddh2o链球菌

28毫升

◦温暖组件37°丙

◦添加12.4克琼脂100毫升ddh2o和微波消融（不要在微波或您将失去太多卷）。微波只是足够长的*融化的琼脂。

◦加入50毫升琼脂的prewarmed混合物，你就准备。

◦涡流混合避免气泡。

◦加入4毫升混合每6平方厘米板

◦允许*冷静而你准备你的细胞。

准备上面层混合所有列出的成分除琼脂。

您将需要一个50毫升锥形的每一个细胞系，你测试。准备下列组合和地方（）在37摄氏°pre。

组合：

◦2二甲醚12.5毫升

◦中频2.5毫升

◦笔/链球菌0.25毫升

◦ddh2o 3.5毫升

标签管。每个细胞系应该有3 - 15毫升锥形管标记105，104，或103，这些都应该有在管细胞。

提升细胞系，通过一个100μ细胞过滤器。

细胞计数。

悬浮细胞在1×105个/毫升（5毫升）。

设立稀释如下：

添加1毫升的珊瑚和1毫升的1×105个/毫升稀释到105管。

加入9.5毫升和500μ玩家从1×105个/毫升到104管和混合反相（你不做这个管-见下文）。

加入1.9毫升的珊瑚和100μ升104管103管。将2.9毫升管从104（这应该留给你共7毫升）

现在融化2.4%琼脂诺贝尔已准备在ddh2o（你这一较早的时候你到底层）。

加入6.2毫升的诺贝尔一个50毫升锥形管和混合的几倍。

检查以确保该管的内容不够酷（你能碰到你的手腕，它应该是舒适的温暖。

现在你需要工作速度快，但避免气泡！！！！！！

添加以下的琼脂/媒体组合，每个管：

添加2毫升的103和105管

添加7毫升到103管。

由翻转几次。

板4毫升混合在每个相应的板。

允许板坐30到60分钟，直到他们是巩固和再仔细地把他们转移到孵化器。

回到步骤4个细胞系。

长期实验你可以养活如果他们正在干或黄色与0.3%琼脂混合