小鼠白细胞介素17（IL-17）试剂盒实验原理及操作步骤

 　　　小鼠白细胞介素17（IL-17）试剂盒实验原理及操作步骤

 

本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：                                                          96T
3pg/ml-120pg/ml
 
使用目的：
小鼠白细胞介素17（IL-17）试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-17（IL-17）含量。
小鼠白细胞介素17（IL-17）试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素-17（IL-17）水平。用纯化的小鼠白细胞介素-17（IL-17）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-17（IL-17），再与HRP标记的白细胞介素-17（IL-17）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素-17（IL-17）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素-17（IL-17）浓度。
小鼠白细胞介素17（IL-17）试剂盒操作步骤
1.         标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
120pg/ml	5号标准品	150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
60pg/ml	4号标准品	150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
30pg/ml	3号标准品	150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
15pg/ml	2号标准品	150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
7.5pg/ml	1号标准品	150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
 
 
2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4.         配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.         温育：操作同3。
8.         洗涤：操作同5。
9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。