ELISA实验结果OD值为何偏低？

ELISA实验是一个非常严谨、极其考验操作者技巧和经验的实验，检测结果数值低、标准曲线梯度差、背景值高、变异系数大等诸多问题也是兵家常事。有很多客户向我们咨询，ELISA实验结果数据总是偏低，不知道是什么问题。恒远生物就为大家总结一下具体原因，一起来看看吧！




一、整体OD值偏低或无信号：

1.试剂盒组分失活

相应对策：使用新的试剂盒，按照说明书要求保存试剂盒

2.试剂盒组分未平衡

相应对策：试剂盒每个组分都需要平衡至室温后进行实验

3.试剂混用或混合不充分

相应对策：保证使用试剂盒内完整一套试剂进行实验，保证溶液充分混合

4.洗液被污染

相应对策：配制新的洗液

5.洗涤液浸泡时间过久或洗板次数过多

相应对策：按照说明书的要求进行操作

6.孵育时间不充分

相应对策：保证充足的孵育时间

7.孵育温度不稳定

相应对策：检查恒温箱，确保孵育温度稳定

8.生物su化抗体或HRP酶结合物不足

相应对策：保证浓缩液取量准确且稀释完

9.生物su化抗体或酶结合物稀释不正确或步骤颠倒

相应对策：按照说明书的步骤和要求进行操作

10. 未加终止液

相应对策：反应结束时，确保每孔加入终止液终止反应

11.终止后未及时读板

相应对策：终止液终止反应后需要在10min内进行读板操作

12.酶标仪设置错误

相应对策：在酶标仪上检查波长和滤光片设置




二、标曲线性佳但样本OD值偏低

1.标准品部分降解

相应对策：按照说明书推荐方式保存标准品。开封后的标准品应以高浓度用EP管分装冻存，保存于-20℃，半个月内使用有效。

2.标准品复溶不当

相应对策：打开前将标准品短暂离心，检查复溶后是否有未溶解的物质

3.标准品稀释不正确

相应对策：按照说明书要求，保证按正确倍比梯度稀释




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