本周焦点:简述ELISA试剂盒固相抗结合原理

本周焦点:简述ELISA试剂盒固相抗结合原理

   已包被抗原或抗体的固相载体在低温并且干燥的条件下，一般可以保存6个月，而有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。


  在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器，不参与化学反应。可作ELISA试剂盒中载体的材料很多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式。


   在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。ELISA试剂盒抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。


   加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。


   从理论来说，温育采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达。

 

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