Cell Counting Kit-8 细胞增殖(CCK-8)

产品名称：Cell Counting Kit-8 细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8),增强型
产品编号：HYCCK-8241
产品组成 500T
CCK-8 增强型溶液 5ml
产品价格：299元

产品简介
Cell Counting Kit-8（简称CCK-8），是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。CCK-8试剂中含有WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐）是一种类似于MTT的化合物，它在电子耦合试剂1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓（1-Methoxy PMS）存在条件下，可以被线粒体内的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物Formazan （参考图1），生成的Formazan数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析，细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

操作步骤
制作标准曲线（测定细胞具体数量时）

1.制备细胞悬液：细胞计数。

2.接种到 96 孔板中：按比例（例如：1/2 比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5 个细胞浓度梯度，每组 3-6 个重复孔。每孔约 100μl 细胞悬液。

3.37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养 2-4 小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。

4.每孔加入 10μl CCK-8 增强型溶液：由于每孔加入 CCK-8 量比较少，有可能因试剂沾在孔壁带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配置含 10% CCK-8 的培养基，以换液的形式加入。注意不要在孔中生成气泡，以免影响吸光度的检测。

5.培养箱内孵育一定时间后测定 450nm 吸光度，制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴)，吸光度为纵坐标(Y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8 后的培养时间。）

保存条件：4℃避光保存，一年有效。-20 ℃可以储藏更久，但反复冻融会增加背景值，干扰实验测定，因此请将经常使用的试剂保存在4 ℃。