一、详细参数
【产品名称】:兔补体片段3a(C3a)ELISA试剂盒技术指导
【检测方法】:酶联免疫法/酶免法(ELISA)
【产品性状】:96T/48T,盒装液体(两种统一规格)
【贮藏条件】:2-8°C
【产品有效期】:6个月,我公司Elisa试剂盒均为批次,可放心购买。
【产品主要成分】:酶标板,试剂,标准品等。
【种属】马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。
【产品单价】(具体折扣欢迎前来咨询),可免费代测,含税含运费。
【标本】血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等
注:标本必须为液体,不含沉淀。
二、四大特性
1.特异性强:不与其它细胞因子反应。
2.重复性好:板内、板间变异系数均小于10%。
3.稳定性高:实验效果很稳定。
4.超灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品,稀释度和样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
三、具体操作方法
以双抗体夹心法为例展示:
1、双抗体夹心法检测抗原
操作步骤如下:
1)将特异性抗体与固相载体结合,形成固相抗体。洗涤除去尚未结
合的抗体及一些杂质。
2)加入待测标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
3)加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4)加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要获得针对受检抗原的特异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清,包被和酶标所使用的抗体分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测。
在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同,如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等)时,应注意可测范围的zui高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
四、客户收集样品要求
·客户需提供待检测抗体和包被用抗原。
·检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆。
·样本收集后应立即-20℃保存,若长期保存应-70℃。
·样本量的要求:若一个指标做复孔检测应不少于250ul,做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足提供500ul以上。
·客户的样本收集后,立即按要求保存,切忌反复冻融。外地客户邮寄需要用干冰运输。邮寄前请与技术支持沟通确认。
五、Elisa试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(480ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
六、Elisa试剂盒标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
七、操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
240ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
120ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
60ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
30ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
15ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
八、兔补体片段3a(C3a)ELISA试剂盒技术指导咨询和订购的方法
1.可来电向我们直接咨询及订购。
2.可点击本页上方“QQ交谈”向我司在线人员咨询及订购。
3.可在本页下方留言栏内留言,我们会在半个工作日内联xi您
公司是中国ELISA试剂盒的专业的销售平台和贸易中心,公司的ELISA试剂盒现全部实行“*优惠”,望新老客户前来购买。