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大鼠尿激酶

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Elisa试剂盒之
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  Elisa试剂盒之大鼠尿激酶的详细资料:

ELISA试剂盒,ELISPOT试剂盒

大鼠尿激酶试剂盒 Rat urokinase,UK ELISA KIT

可测种属:人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、猴、马…
可测标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液
规格:96T/48T 中英文双版说明书 提供代测 科研试剂
经营品牌:RD、RB、IBL
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月
运输条件:低温运输,用干冰或者冰袋低温运输。

大鼠尿激酶 ELISA技术操作要点,酶和底物
ELISA中所用的酶要求纯度高、催化反应的转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格不贵、制备成的酶标抗体或抗原性质稳定,继续保留着它的活性部分和催化能力。在受检标本中不存在与标记酶相同的酶。另外它的相应底物应易于制备和保存,价格低廉,有色产物易于测定,光吸收高。ELISA中zui常用的酶为辣根过氧化酶(HRP)和从牛肠粘膜或大肠杆菌提取的碱性磷酸酶(AP)。
HRP在蔬菜作物辣根中含量很高,纯化方法也不复杂。它是一种糖蛋白,含糖量约18%;分子量为44kD;是一种复合酶,由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成的一种卟啉蛋白质。主酶为无色糖蛋白,在275nm波长处有zui高吸收峰;辅基是深棕色的含铁卟啉环,在403nm波长处有zui高吸收峰。
ELISA技术操作要点,结合物
酶标记的抗原或抗体称为结合物(conjugate)。抗原由于化学结构不同,可用不同的方法与酶结合。如为蛋白质抗原,基本上可参考抗体酶标记的方法。制备抗体酶结合物的方法通常有以下几种。
1.戊二醛交联法戊二醛是一种双功能团试剂,可以使酶与蛋白质或其他抗原的氨基通过它而偶联。戊二醛交联可用一步法(如连接AP),也可用二步法(如连接HRP)。举例如下:
2~5mg纯抗体与5mgAP混合于0.1mol/LpH6.8的磷酸缓冲液1ml中,4℃下对同上缓冲液透析平衡。磁力搅拌下,缓慢加入1%戊二醛0.05ml,在室温下放置2小时。在4℃下对0.05mol/LpH8.0Tris缓冲液透析平衡,即得酶标抗体。
辣根过氧化物酶可溶解于50%饱和度硫酸铵中。用上法交联后可用50%饱和度硫酸铵沉淀酶标抗体,弃去上清中游离酶。
戊二醛一步法操作简便、有效,而且重复性好。缺点是交联时分子间的比例不严格,大小也不一,影响效果。
制备HRP抗体结合物也可用二步法,即先将HRP与戊二醛作用,透析除去戊二醛,在pH9.5缓冲液中再与抗体作用而形成酶标抗体。此法的效率可高于一步法10倍左右。
2.过碘酸盐氧化法本法只用于HRP的交联。该酶含18%碳水化合物,过碘酸盐将其分子表面的多糖氧化为醛基。用硼氢化钠(NaBH4)中和多余的过碘酸。酶上的醛根很活泼,可与蛋白质结合,形成按摩尔比例结合的酶标结合物。有人认为此法为辣根过氧化物酶交联zui有效的方法。但也有只认为由于所用试剂较为剧烈,各批实验结果不易重复。

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